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BCA蛋白定量試劑盒說明書

BCA Protein Assay Kit

BCA蛋白定量試劑盒

目錄號：K0014

保存條件：BSA標(biāo)準(zhǔn)品2-8℃保存，其它組分室溫保存。

組分說明

            Cat. No.                             K0014

            Kit Size             500 次/微孔，50 次/試管

            試劑  A                100 ml

            試劑  B                3 ml

            BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 （2mg/ml）        2 ml

               本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡介

　　BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于  BCA（Bicin

-choninic   Acid）法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其

原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu²⁺絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將Cu²⁺還

處原成有高的光吸收Cu⁺。BCA試劑值，可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結(jié)質(zhì)濃合，形成度成正比，可根據(jù)吸收穩(wěn)定的有顏色的復(fù)值合物。在的大小來562測 定蛋nm白質(zhì)的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測定范圍為20～2000 μg/ml。

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品可以采用分光光度計(jì)（試管檢測法）或者酶標(biāo)儀（微孔檢測法）測定蛋白濃度。

2．建議每次測定蛋白樣品時(shí)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。

3．BSA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用1×PBS或0.9%生理鹽水進(jìn)行

   稀釋）。

4．完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時(shí)后，須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測，否則會(huì)影響蛋

   白定量的準(zhǔn)確度。

5．如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見附表1），可采用Bradford法蛋白定量試劑

   盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。

操作步驟

1．稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。

管號      稀釋液用量（μl）  BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl）   BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/μl）

A                0                100                  2

B               200               200                       1

C               200         200（從B管中取）               0.5

D               200         200（從C管中取）               0.25

E               200         200（從D管中?。?             0.125

F               200         200（從E管中?。?             0.0625

G               200                0                       0（空白）

2．配置BCA工作液：

   1）計(jì)算BCA工作液總量：                      

   BCA工作液總量=（BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)+未知樣本個(gè)數(shù)）×復(fù)孔數(shù)×每個(gè)樣本BCA工作液體積

   舉例：BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)為7個(gè)，未知樣本個(gè)數(shù)2個(gè)，復(fù)孔數(shù)3個(gè)。

   試管檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×2 ml/每個(gè)樣本工作液體積=54 ml

   微孔檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×200 μl/每個(gè)樣本工作液體積=5.4ml

   2）根據(jù)計(jì)算出的BCA工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50：1的體積比，配制

   BCA工作液，充分混勻。

   注意：1）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時(shí)，多配制1-2個(gè)孔。

   2）新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存24小時(shí)。

3．定量檢測

3a.試管檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各100 μl

   分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個(gè)測定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。

   2）向每個(gè)試管中各加入2 ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘或室

   溫孵育2小時(shí)。

   3）將各管冷卻至室溫。

   4）用分光光度計(jì)在562 nm處測定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，同時(shí)做好記錄。

   5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

3b.微孔檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各25 μl分

   別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)測定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。

   2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘。

   3）冷卻至室溫。

   4）用酶標(biāo)儀在540-590 nm范圍內(nèi)，測定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品吸光值，做好記錄。

   5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

   注意：1）BCA法測定蛋白濃度時(shí)，吸光值會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5 分鐘內(nèi)完成，否則會(huì)影響蛋白定量的準(zhǔn)確度。

   2）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

   3）由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。

   4）未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計(jì)算得出, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

   5）如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。

    4．BCA蛋白定量分析結(jié)果舉例：

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：